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1.什么是細胞系鑒定？
所謂細胞系鑒定即通過 STR（短串聯(lián)重復(fù)）圖譜所建立細胞系的遺傳特征。一株細胞系的遺傳特征確立后，細胞系可以通過定期的檢測，以防止出現(xiàn)細胞系被誤認(rèn)或交叉污染的情況。
2.為什么要進行細胞系鑒定？
首先進行細胞系STR鑒定是很重要的。很多生物醫(yī)藥的研究都采用培養(yǎng)細胞來進行，這些細胞可能是受贈于其它研究人員,也可能是從細胞庫(如美國 ATCC,American Type Culture Collection)得來。據(jù)估計，15-20%的實驗室，實驗中所使用的細胞已經(jīng)不是原來的細胞系，或者與其它細胞系發(fā)生了交叉污染。顯然，細胞系遭到污染、特征鑒別錯誤，將會大大的威脅著基于這些細胞而發(fā)表的論文質(zhì)量和研究發(fā)現(xiàn)的正確性。為此，很多細胞庫現(xiàn)在都要對提交來的細胞系進行鑒定，并對細胞系之間的交叉污染進行監(jiān)測。
現(xiàn)在很多機構(gòu)都已經(jīng)認(rèn)識到這個的重要性，ATCC和FDA，這些機構(gòu)要求對用于制藥領(lǐng)域的實驗中所使用的材料 — 諸如細胞系 — 應(yīng)該進行“身份鑒定”和純度測試。很多雜志也要求使用細胞系的文章提供STR指紋圖譜數(shù)據(jù)。
FDA建議研究人員在培養(yǎng)細胞的較早階段(細胞培養(yǎng)第一周)來鑒定細胞系的身份。細胞在被凍存前應(yīng)再一次進行鑒定；對于活躍生長的細胞，每兩個月應(yīng)鑒定一次；文獻發(fā)表前也應(yīng)對細胞系身份進行鑒定。
如果一個實驗室使用不止一種細胞系，則應(yīng)在實驗最開始時，就要對所有的細胞系進行鑒定，以便排除交叉污染。
這樣將減少由于細胞系發(fā)生交叉污染或身份誤認(rèn)，將導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)的無效或數(shù)據(jù)誤導(dǎo)。
3.細胞系用錯的概率有多大？
據(jù) ATCC 估計，1977 年錯誤使用細胞的概率是 16%，1999 年是 18%。根據(jù)我們的經(jīng)驗，國內(nèi)細胞系用錯的概率不低于 20%。即如果一個研究所有二十個課題組，按概率估計，有 4 個課題組用的細胞是錯的。
4.什么細胞最容易污染別的細胞？
Hela 細胞。五十多年來，Hela細胞系被廣泛用于醫(yī)學(xué)和生物學(xué)領(lǐng)域的研究，對當(dāng)代生命科學(xué)的發(fā)展屢建奇功，是名副其實的生物學(xué)研究的親歷踐行者。同時很多被廣泛研究的細胞系都被Hela細胞淹沒，因為她長得快，當(dāng)你發(fā)現(xiàn)自己的一個培養(yǎng)瓶里的細胞突然長得很好，而以后都用它傳代做實驗的話，十之八九是搞錯了。
早在1967年，遺傳學(xué)家Stanley Gartler發(fā)現(xiàn)HEp-2和INT 407這兩種細胞系都是生物學(xué)領(lǐng)域研究最多的腫瘤細胞系——Hela細胞。
5.有哪些細胞曾被 Hela 污染？
lnt-407、HEp-2、WISH （人羊膜細胞）、Acc-M（人原發(fā)性延腺癌細胞）、Bcap-37（人乳腺癌細胞）、HAC-84（人肺腺癌克隆）、Hepatoma（人肝癌細胞）、HUL-42（人肺腺癌細胞）、CNE（人鼻咽癌細胞）、SPC-A-1（人肺腺癌細胞）、Tca-8113（人舌鱗癌細胞）、YTMLC（個舊肺鱗癌細胞）等一百余種。
6.如何進行細胞系鑒定？
細胞系鑒定目前主要基于國際身份認(rèn)證委員會的標(biāo)準(zhǔn)。依據(jù)該標(biāo)準(zhǔn)，可以通過多重?zé)晒?PCR 技術(shù)，對人源 8 個 STR 位點以及 1 個性別決定位點進行檢測。下表為這些位點的具體的遺傳信息。
7.什么時候需細胞系鑒定？
1）當(dāng)建立或獲得一個新的細胞系時；
2）一個涉及到細胞試驗項目開始/結(jié)束時；
3）在細胞凍存之前，或細胞已連續(xù)培養(yǎng) 2～3 個月時；
4）發(fā)表文章或申請課題經(jīng)費前；
5）細胞系表現(xiàn)不穩(wěn)定或結(jié)果與預(yù)期差別較大時；
6）當(dāng)實驗室使用超過一種細胞系時，所有細胞系最好先鑒定以排除交叉污染的可能；
8.如何提供鑒定樣本？
每種細胞需單獨收集在 1.5ml 離心管中，細胞數(shù)目不少于 10的6次方個。細胞需要離心沉淀，并且以 PBS 清洗盡可能去除上清培養(yǎng)基，沉淀沉淀進行冰凍保存與寄送。
9.如何知道細胞系是否發(fā)生交叉污染了？
如果存在細胞系之間發(fā)生交叉污染，而且鑒定用的細胞可能有兩種以上的細胞系時，那么在進行 STR 位點檢測的時候，多個位點會出現(xiàn)兩個以上的峰。峰高值表示該等位基因的信號強度，理論上峰值與樣本的 DNA 濃度有直接的關(guān)系。因此，存在交叉污染的混合細胞系中，其中一個位點中某些峰會明顯高于其他的峰，其中大峰是屬于混合細胞系中那個主要細胞系，而小峰則屬于那個次要細胞系。
值得注意的是，當(dāng)發(fā)生兩個或以上細胞混合的時候，檢測結(jié)果看起來非常像細胞系的“遺傳不穩(wěn)定”——當(dāng)一個細胞系存在亞群時，尤其是一些癌細胞系， 由于遺傳不穩(wěn)定的存在，在一些位點的 STR 特性會不同。因此經(jīng)驗豐富的分子專家是非常重要的，他能夠幫助分析復(fù)雜的電泳圖譜（STR 峰圖），從而判斷是否由于發(fā)生細胞系交叉污染而導(dǎo)致多等位基因情況。
10.如何根據(jù) STR 數(shù)據(jù)判斷細胞系的身份？
收到細胞系鑒定結(jié)果以及 STR 信息，可以與參考數(shù)據(jù)庫進行比對。如果細胞樣本的每個 STR 位點和參考細胞 STR 位點都能重合匹配，即說明該細胞系正確，反之則說明你的細胞系可能被錯誤標(biāo)記，交叉污染或發(fā)生遺傳不穩(wěn)定。一般說來，匹配度≥80%即可認(rèn)為該細胞系正確，匹配度＜80%則說明該細胞系的來源需要被懷疑。
如果細胞系被鑒定出發(fā)生交叉污染或錯誤標(biāo)記，則需要拿更早代數(shù)的細胞進行鑒定，從而找到問題的起源或者直接從可靠的機構(gòu)購買一株新的細胞系。
11.如果細胞系沒有在數(shù)據(jù)庫中比對出結(jié)果怎么辦？
如果已知數(shù)據(jù)庫中沒有找到你的細胞信息，你可以用自己的細胞遺傳信息建立自己的遺傳特性，以便后期進行自己細胞庫的比對。
12. 細胞系交叉污染或錯誤鑒定對研究是否有影響。
答案是肯定的。使用錯誤的細胞系或者是被污染的細胞系做研究，只會造成時間，金錢和精力的損失，以及造成實驗結(jié)果的不一致和不可重復(fù)。因此如果用被污染或錯誤的細胞系做研究，在發(fā)表文章或做進一步研究時極有可能需要用正確的細胞再重復(fù)實驗。
13. 全球因為細胞系用錯浪費了多少錢？
據(jù)不*統(tǒng)計，僅就 HEp-2 與 Int-407 這兩株細胞（它們實際上是 Hela）， 直接浪費的投入是 7 億美金，間接浪費了 7 億美金。
14. 因為用錯細胞，產(chǎn)生了多少垃圾文章？
據(jù)不*統(tǒng)計，僅就 HEp-2 與 Int-407 這兩株細胞（它們實際上是 Hela）， 前者發(fā)表了近 6000 篇 SCI（17 萬次引用），后者發(fā)表了近 1400 篇 SCI。
15. 用錯細胞時間最長的持續(xù)了多少時間？
瑞典有一個科學(xué)家，在三十年的時間里都以為自己的細胞是正確的，直到做了細胞鑒定之后發(fā)現(xiàn)是錯誤的。越早發(fā)現(xiàn)錯誤越好，鑒定之后是正確的話，自己也放心。
16. 為什么報告內(nèi)最終結(jié)論，會出現(xiàn)匹配不上任何已知數(shù)據(jù)情況？
最大的可能性是因為這株細胞的標(biāo)準(zhǔn)序列并沒有收錄在國際的細胞庫之中，導(dǎo)致送檢樣本與任何的序列都不匹。出現(xiàn)這種情況大多數(shù)是因為該細胞系，可能是由國內(nèi)課題組自主建系的。
17. 國內(nèi)有類似的 STR 標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)庫嗎？
是有的，這個是協(xié)和醫(yī)院建立的一個國家實驗細胞資源共享平臺，國家實驗細胞資源平臺在里面會收錄一些國內(nèi)自主建系的細胞的標(biāo)準(zhǔn)序列。
18. 對于 STR 位點引物設(shè)計有什么要求嗎？
設(shè)計其實很簡單，并且很容易使用。但是由于這個位點的選擇和優(yōu)化是非常枯燥并且耗時耗力的工作，建議由專業(yè)的服務(wù)方進行設(shè)計和合成。
19. 除了檢測人源的細胞株，還可以檢測其他動物的細胞或者原代細胞嗎？
技術(shù)上是可以檢測的。但是鼠源細胞在結(jié)果上跟人源細胞有明顯的區(qū)別。鼠源一個 STR 位點會出現(xiàn)上百個重復(fù)，只能證明待測樣本不是人源的樣本。但是屬于小鼠的具體哪一種細胞株，無法確定，因此也不能排除鼠源細胞之間出現(xiàn)交叉污染的可能。
至于人的原代細胞，由于國際上的數(shù)據(jù)庫里面沒有收錄原代細胞標(biāo)準(zhǔn)序列，最終的檢測結(jié)果也是匹配不上任何的已知序列的。
